الملخص

يتصف الورم النقوي MM بتراكم الخلايا البلازمية الخبيثة MMPC في نخاع العظم، ورغم اللجوء حالياً لتطبيق المعالجة عالية الجرعةHDT ، وإدخال مثبطات البروتوزوم والعوامل المعدلة للمناعة فإن حدوث النكس بعد تطبيق العلاج عالي الجرعة، خلال مدة لا تتجاوز العامين وسطياً، يبقى أمراً متوقعاً. أصبح التفاعل التسلسلي الكمي المعروف بـ qASO-PCR، والذي يستهدف الموقع معاد الترتيب من سلاسل الغلوبلين المناعي الثقيلة IgH، من المقاربات المعتمدة في رصد المرض المتبقي الأدنى MRD. ورغم ذلك فإنه لا بد من اللجوء لتصميم بادئات فردية للـ PCR لكل مريض على حدة، مما يجعل الطريقة غير ملائمة للمخابر السريرية المعيارية لأنها تتطلب خبرة كبيرة ومعرفة واسعة بعلوم الوراثة المناعية، إضافة إلى ذلك، فإن النسائل الورمية عرضة للإصابة بطفرات إضافية (ضمن منطقة CDR3 مثلاً) يصعب تمييزها. في هذا البحث سنتطرق لتقنية التسلسل المعروفة بـ NGS massive-parallel ultra-deep sequencing والمرتكزة على مجموعات بادئة تتيح التحري الفعال لأي من الأضداد معادة الترتيب ومورثات السلاسل الخفيفة MMPCs. ومن خلال استخدام الطريقة مزدوجة السوية للتقييم الكمي للـ IgH في المستوى الأول، والتقييم الكمي لسلاسل كبا ولامبدا الخفيفة في المستوى الثاني، فإننا نتمكن من التغلب على ظاهرة إغفال أو تجاوز المرضى ذوي تسلسلات IgH اللامضخمة. هذا وإن استخدام بروتوكول PCR معياري موحد لكل مرض يجعل الطريقة قابلة للتطبيق في أي مخبر جزيئي سريري، بل ويسمح بالتحري الكمي لكل تسلسل نسيلي بغض النظر عن التغيرات التي تطرأ على تسلسل الدنا بسبب الطفرات المستمرة، مما يمنح هذه الطريقة موثوقية ومعولية عالية مقارنة بالـ qASO-PCR. إن هذا التطبيق عالي الحساسية للتقييم الكمي لكل من الـ IgH والسلاسل الخفيفة بحيث يمكّن من تحري خلية ورمية واحدة من أصل 33.000 خلية بائية سليمة في تفاعل PCR وحيد. وقد لوحظت هذه الحساسية في 5 حالات من الميلوما وفي نسائل خلوية للمفوما بوركت معادة الترتيب من VH1 لـ VH5 وفي خطوط خلوية لحالتي ميلوما معادة الترتيب لسلاسل كبا ولمبدا الخفيفة على التوالي. وستعتمد هذه الطريقة كتقنية متعددة الاستعمالات تسمح بمسح MRD في أورام خلايا B الأخرى كالـ B-CLL والتي يمثل فرط الطفرات الجسدية فيها صعوبة وعرقلة لتطبيق الـ qASO-PCR.

---

كلمات مفتاحية : NGS، الورم النموي المتعدد، B-NHL، ضبط هدأة المرض،qASO-PCR ، PCR الغلوبلين المناعي.

---

المراجع :

1. van Nieuwenhuijzen N, Spaan I, Raymakers R, Peperzak V. From MGUS to multiple myeloma, a paradigm for clonal evolution of premalignant cells. Cancer Res. 2018: p. 2449–2456.
2. Nowakowski GS, Witzig TE, Dingli D, Tracz MJ, Gertz MA, Lacy MQ, et al. Circulating plasma cells detected by flow cytometry as a predictor of survival in 302 patients with newly diagnosed multiple myeloma. Blood. 2005: p. 2276-2279.
3. Kyle R, Gertz M, Witzig T. Review of 1027 patients with newly diagnosed multiple myeloma. Mayo Clin Proc. 2003: p. 21-33.
4. Witzig T, Gertz M, Pineda A, Kyle R, Greipp P. Detection of monoclonal plasma cells in the peripheral blood stem cell harvestsof patients with multiple myeloma. Br J Haematol. 1995: p. 640–642.
5. Bird J, Bloxham D, Samson D, Marcus R, Russell N, Kelsey S, et al. Molecular detection of clonally rearranged cells in peripheral blood progenitor cell harvests from multiple myeloma patients. Br J Haematol. 1994: p. 110-6.
6. Craig J, Langlands K, Parker A, Anthony R. Molecular detection of tumor contamination in peripheral blood stem cell harvests. Exp Hematol. 1994: p. 898-902.
7. Mariette X, Fermand J, Brouet J. Myeloma cell contamination of peripheral blood stem cell grafts in patients with multiple myeloma treated by high-dose therapy. Bone Marrow Transplant. 1994: p. 47-50.
8. Dreyfus F, Ribrag V, Leblond V, Ravaud P, Melle J, Quarre M, et al. Detection of malignant B cells in peripheral blood stem cell collections after chemotherapy in patients with multiple myeloma. Bone Marrow Transplant. 1995: p. 707-11.
9. Gertz M, TWitzig T, Pineda A, Greipp P, Kyle R, Litzow M. Monoclonal plasma cells in the blood stem cell harvest from patients with multiple myeloma are associated with shortened relapse-free survival after transplantation. Bone Marrow Transplantation. 1997: p. 337–342.
10. Kiel K, Cremer F, Rottenburger C, Kallmeyer C, Ehrbrecht E, Atzberger A, et al. Analysis of circulating tumor cells in patients with multiple myeloma during the course of high-dose therapy with peripheral blood stem cell transplantation. Bone Marrow Transplantation. 1999: p. 1019–1027.
11. Cremer F, Ehrbrecht E, Kiel K, Benner A, Hegenbart U, Ho A, et al. Evaluation of the kinetics of the bone marrow tumor load in the course of sequential high-dose therapy assessed by quantitative PCR as a predictive parameter in patients with multiple myeloma. Bone Marrow Transplantation. 2000: p. 851–858.
12. Bakkus MH, Bouko Y, Samson D, Apperley JF, Thielemans K, Van Camp B, et al. Post-transplantation tumour load in bone marrow, as assessed by quantitative ASO-PCR, is a prognostic parameter in multiple myeloma. British Journal of Haematology. 2004: p. 665–674.
13. Rawstron AC, Child CA, de Tute RM, Davies FE, Gregory WM, Bell SE, et al. Minimal Residual Disease Assessed by Multiparameter Flow Cytometry in Multiple Myeloma: Impact on Outcome in the Medical Research Council Myeloma IX Study. J Clin Oncol. 2013: p. 2540-2547.
14. Dingli D, Nowakowski GS, Dispenzieri A, Lacy MQ, Hayman SR, Rajkumar SV, et al. Flow cytometric detection of circulating myeloma cells before transplantation in patients with multiple myeloma: a simple risk stratification system. Blood. 2006: p. 3384-3388.
15. Puig N, Sarasquete M, Balanzategui A, Martınez J, Paiva B, Garcia H, et al. Critical evaluation of ASO RQ-PCR for minimal residual disease evaluation in multiple myeloma. A comparative analysis with flow cytometry. Leukemia. 2013: p. 1–7.
16. García-Sanz R, López-Pérez R, Langerak A, González D, Chillón M, Balanzategui A. Heteroduplex PCR analysis of rearranged immunoglobulin genes for clonality assessment in multiple myeloma. Haematologica. 1999: p. 328–335.
17. Martinez-Lopez J, Lahuerta JJ, Pepin F, González M, Barrio S, Ayala R. Prognostic value of deep sequencing method for minimal residual disease detection in multiple myeloma. Blood. 2014: p. 3073-3079.
18. Yao Q, Bai Y, Orfao A, Chim CS. Standardized Minimal Residual Disease Detection by Next-Generation Sequencing in Multiple Myeloma. Frontiers in Oncology. 2019: p. 449.
19. Ha J, Lee H, Shin S, Cho H, Chung H, Jang JE. Ig Gene Clonality Analysis Using Next-Generation Sequencing for Improved Minimal Residual Disease Detection with Significant Prognostic Value in Multiple Myeloma Patients. J Mol Diagn. 2022: p. 48-56.
20. Katagiri S, Yonezawa T, Kuyama J, Kanayama Y, Nishida K, Abe T, et al. Two distinct human myeloma cell lines originating from one patient with myeloma. Int J Cancer. 1985: p. 241-6.
21. Nilsson K, Bennich H, Johansson S, Pontén J. Established immunoglobulin producing myeloma (IgE) and lymphoblastoid (IgG) cell lines from an IgE myeloma patient. Clin Exp Immunol. 1970: p. 477-89.
22. Gazdar A, Oie H, Kirsch I, Hollis G. Establishment and characterization of a human plasma cell myeloma culture having a rearranged cellular myc proto-oncogene. Blood. 1986: p. 1542-49.
23. Pulvertaft J. Cytology of Burkitt’s Tumour (African Lymphoma). Lancet. 1964: p. 238-40.
24. Rowe M, Rowe DT, Gregory CD, Young LS, Farrell PJ, Rupani H, et al. Differences in cell growth phenotype reflect novel patterns of Epstein-Barr virus latent gene expression in Burkitt’s lymphoma cells. The EMBO Journal. 1987: p. 2743-51.
25. Magrath I, Pizzo P, Whang-Peng J, Douglass E, Alabaster O, Gerber P, et al. Characterization of lymphoma-derived cell lines: comparison of cell lines positive and negative for Epstein-Barr virus nuclear antigen. I. Physical, cytogenetic, and growth characteristics. J Natl Cancer Inst. 1980: p. 465-76.
26. Magrath I, Freeman C, Pizzo P, Gadek J, Jaffe E, Santaella M, et al. Characterization of lymphoma-derived cell lines: comparison of cell lines positive and negative for Epstein-Barr virus nuclear antigen. II. Surface markers. J Natl Cancer Inst. 1980: p. 477-83.
27. van Dongen J, Langerak A, Brüggemann M, Evans P, Hummel M, Lavender F, et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: Report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003: p. 2257–2317.