الملخص

خلفيّة البحث وهدفه: إن متلازمة المبيض متعدّد الكيسات مرض مزمن معقد ومتعدّد العوامل، وتترافق مع مجموعة من الأعراض، منها: العقم وحب الشباب وانقطاع الحيض والشعرانية ووجود الكيسات على المبيض. توسّعت الدراسات حول العوامل المسبّبة للمتلازمة كونها متعدّدة وبسبب تأثيرها الكبير على نوعية حياة المريضة وقدرتها على الإنجاب، ويُعتقد أن الأهبة للإصابة بالمتلازمة ترتبط جزئياً بالاستعداد الجينيّ، وقد تم تحديد عدد واسع من الجينات المرتبطة بالهرمونات الجنسيّة واستقلابها، إضافةً إلى مستقبل فيتامين D نظراً لتواسطه أفعال فيتامين D الحيويّة الهامّة في الجهاز التناسليّ الأنثويّ.

مواد البحث وطرائقه: هدفت دراستنا للتقصي عن تواتر التعدّد الشكليّ BsmI في جين مستقبل الفيتامين D لدى عينة من مريضات متلازمة المبيض متعدّد الكيسات بالمقارنة مع مجموعة شاهدة، حيث شملت العينة 50 مريضة، و 53 سيدة سليمة كشاهد، واعتمدت طريقة تحديد التعدّد الشكليّ لأطوال شدف التقييد RFLP حيث تم عزل DNA من الدم المحيطي بطريقة يدويّة معتمدة على اليوريا، وإجراء تفاعل البوليمراز التسلسليّ PCR لتضخيم الشدفة المطلوبة وهضم الناتج بإنزيم القطع BsmI.

النتائج: توزّعت الأنماط الجينية كالتالي :35 (70%) من مريضات متلازمة المبيض متعدّد الكيسات من النمط الجينيّ Bb مقابل 26 (49%) أنثى سليمة، 10 (20%) مريضات من النمط BB مقابل 18 (34%) أنثى سليمة، 5 (10%) مريضات من النمط الجيني bb مقابل 10 (17%) أنثى سليمة.

الملخص: أظهرت دراستنا عدم وجود فارق يُعتد به إحصائياً بين مجموعتيّ الدراسة من حيث توزع الأنماط الجينية والأليلات في الموقع BsmI من جين VDR لدى جمهرة من سوريات أصحاء ومريضات متلازمة المبيض متعدّد الكيسات، وقد اتفقت في ذلك مع بعض الدّراسات واختلفت مع أخرى هذا ما يُعزى لاختلاف حجم العيّنة والإثنيات المدروسة.

---

كلمات مفتاحية : مستقبل فيتامين D، متلازمة المبيض متعدّد الكيسات، التعدّد الشكليّ وحيد النكليوتيد، تفاعل البولميراز التسلسليّ ,Vitamin D Receptor (VDR), Polycystic Ovary Syndrome (PCOS), Polymerase Chain Reaction (PCR), Restriction fragment length polymorphism (RFLP), BsmI.

---

المقدمة Introduction

تعدّ متلازمة المبيض متعدّد الكيسات الإضطراب الغديّ الصماويّ Endocrine Disorder الأكثر شيوعاً عند النساء في سن الإنجاب، يصيب النساء من عمر 18 حتى 44 عاماً، وبمعدّل انتشار يصل إلى 10-15% اعتماداً على معايير التشخيص المتّبعة والمجموعة السكانيّة المدروسة في المناطق الجغرافيّة المختلفة^(1,2)، وفي دراسة أجريت مؤخراً في سوريا تبيَّن أن معدل انتشار المتلازمة يبلغ 27.4%⁽³⁾.

تتصف المتلازمة بأنها مرض معقّد Complex ومتعدّد العوامل Multifactorial، تتداخل فيها العوامل المسبّبة الصماويّة والجينيّة والبيئيّة^(4,5)، وإن انتشار المتلازمة بشكل واضح لدى الأقارب من الدرجة الأولى بنسبة تُقارِب 55-60% في العائلات الصغيرة يدعم فرضية الوراثة الجسديّة السائدة لهذه المتلازمة Autosomal Dominant Inheritance⁽⁵⁾.

يتم تشخيص المتلازمة وفقاً لمعايير روتردام المعدلة بوجود معلَمين من أصل ثلاثة: قلّة أو انعدام الإباضة Oligo-anovulation، فرط الأندروجين Hyperandrogenism، مبيض متعدد الكيسات Polycystic Ovaries (وجود 20 جريب أو أكثر بقطر 2-9 ملم أو أكثر في كل مبيض و/أو وجود مبيض بحجم يتجاوز 10 مل)⁽⁶⁾.

توسّعت الدراسات المتعلّقة بالعوامل المسبّبة المحتملة للإصابة بمتلازمة المبيض متعدّد الكيسات لتشمل مجموعة واسعة من الجينات المرتبطة بالمرض، وقد لوحظ اختلاف الأساس الجيني للمتلازمة بين العائلات وداخلها لكنّه يرتبط بمسارٍ مشتركٍ، ومنها: الجينات المرتبطة باصطناع الأندروجين في المبيضين والكظر (CYP11a، CYP21، CYP17) وجين مستقبل الأندروجين Androgen Receptor (AR) والجينات المشاركة في عمل وتنظيم الغدد التناسلية (LH، FSHR) والجينات المسؤولة عن إنتاج وعمل الأنسولين وجين مستقبل فيتامين D^(5,7,8).

يتم تنظيم ما يقارب 3% من الجينوم بشكل مباشر أو غير مباشر بواسطة فيتامين D ومستقبله، مما يشير إلى الأدوار الهامة والواسعة لهما في الصحّة والمرض⁽⁹⁾، وقد عُثر على مستقبل فيتامين D في كل من المبيض والرحم وقناة فالوب والمهبل والمشيمة لدى البشر والحيوانات، هذا ما يؤكّد على الدور المباشر لفيتامين D في هذه الأعضاء حيث تشير الدراسات إلى أن فيتامين D يلعب دوراً هاماً في تنظيم العمليات المبيضيّة التي تحدّد خصوبة الأنثى، كما يملك فيتامين D تأثيرا تحفيزياً على إنتاج الإستراديول والإسترون والتعبير عن الأروماتاز CYP19A1 الذي يحوّل الأندروجين إلى إستروجين، وتزايدت مؤخّراً الدّراسات التي تشير إلى وجود علاقة بين انخفاض مستوى فيتامين D مع نقص الخصوبة والاضطرابات الاستقلابيّة والصماويّة ومتلازمة المبيض متعدّد الكسيات^(10,11,12).

يمارس فيتامين D وظائفه الحيويّة في الجسم من خلال ارتباطه بألفة عالية مع مستقبله النووي VDR. تؤثر التعدّدات الشكليّة في جين VDR بوظيفته وترتبط مع العديد من الأمراض ولاسيما المتعلّقة بنقص فيتامين D. يتوضع التعدّد الشكليّ BsmI (rs1544410) G>A في الإنترون الثامن قرب المنطقة ′3 غير المترجمة untranslated region  (3′UTR) ويؤثر هذا التعدد الشكلي في ثباتية واستقرار mRNA المُنتسخ ⁽¹³⁾، كما يمكن أن يؤثر هذا التعدّد الشكليّ في مستوى التعبير الجيني عن VDR ممّا يؤثر على الوظائف الحيويّة الهامّة لفيتامين D من خلال مستقبله^(14,15).

 

المواد والطرائق Materials and Methods

تم تصميم الدراسة بنمط حالة شاهد Case-Control شملت 50 مريضة مشخصة بـ PCOS و53 سيدة سليمة كشاهد، وكانت معايير التضمين Inclusion Criteria للمجموعة المرضيّة: مريضات مشخّصات بمتلازمة المبيض متعدّد الكيسات، أما معايير الاستبعاد Exclusion Criteria: المريضات اللواتي لديهن أسباب أخرى لفرط أندروجين الدّم مثل فرط برولاكتين الدّم والأورام المفرزة للأندروجين ومتلازمة كوشينغ، أو اللواتي لديهن أمراض أخرى كالسكريّ أو سرطان المبيض أو الكظر أو فرط تنسج كظري خلقي، والحوامل، واللواتي يتناولن الأدوية المؤثّرة على توازن الكالسيوم مثل الكورتيكوستيروئيدات، وكذلك متمّمات فيتامين D والأدوية التي تتداخل مع مستويات الهرمونات مثل مانعات الحمل الفمويّة أو مضادّات الأندروجين.

المجموعة الشاهدة: سيدات ذوات دورات شهريّة منتظمة، مشعر كتلة الجسم ضمن المجال الطبيعيّ، مع مستويات طبيعية من الأندروجين وليس لديهم أي تاريخ عائليّ للشعرانيّة، ومتطابقة مع المجموعة المرضيّة من حيث الفئة العمرية (18-44 سنة).

حصلت هذه الدراسة على موافقة لجنة أخلاقيات البحث العلميّ في جامعة دمشق بتاريخ 24/10/2023، وبرقم 5675.

تم جمع العينات الدموية للأصحّاء والمرضى في الفترة الواقعة بين شهر أيلول من عام 2023 حتى شهر أيار من عام 2024 إذ بُزل 3 مل دم من كل مشارك على أنبوب يحوي مانع تخثّر EDTA، ومن ثم استُخلص DNA بطريقة يدويّة ناجحة معتمدة على اليوريا نظراً لخواصها الممسخة للبروتين والمثبطة لإنزيم DNase، وكانت العينات ذات تركيز ونقاوة جيدين.

تم إجراء تفاعل Polymerase Chain Reaction (PCR) باستخدام المشارع ذات التسلسل^(16,17):

For 5’-CAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3’

Rev 5’-CACTTCGAGCACAAGGGGCGTTAGC-3’

والتي تعطي شدفة بطول 2000bp تحوي موقع القطع لإنزيم BsmI باستخدام البرنامج الحراريّ التالي:

أُظهرت النواتج بالترحيل على هلامة آغاروز 1.5%.

الهضم بإنزيم القطع: استُخدم الإنزيم من شركة NewEngland Biolabs ويعمل هذا الإنزيم بدرجة حرارة 65º ويفقد فعاليته بالحضن في 80º لمدة 20 دقيقة، وأُظهرت نواتج القطع بالترحيل على هلامة آغاروز 1%.

تم إجراء التحليل الإحصائيّ للأنماط الجينيّة باستخدام برنامج GraphPad Prism (version 8.0.1).

تم مقارنة توزّع الأنماط الجينيّة والألائل بين مجموعتيّ الدّراسة باستخدام اختبار Chi-square لمعرفة فيما إذا كانت الفروقات الملاحظة يُعتد بها إحصائياً (P-value< 0.05)، أو أن هذه الفروقات ناتجة عن المصادفة (P-value> 0.05).

 

النتائج Results

ينتج عن تفاعل PCR شدفة من DNA بطول 2000bp (الشكل 1).

عند الهضم بإنزيم القطع تظهر الأنماط الجينيّة بعد الرحلان بالشكل التالي: حالة تماثل الزيجوت Homozygotic بغياب موقع القطع تظهر عصابة واحدة بطول 2000bp (النمط الجيني BB)، حالة تماثل الزيجوت Homozygotic بوجود موقع القطع تظهر عصابتين بطول 650bp و1350bp (النمط الجيني bb)، حالة تغاير الزيجوت Heterozygotic تظهر ثلاث عصابات (2000, 1350, 650) (النمط الجيني Bb) (الشكل 2).

 

حيث توزّعت الأنماط الجينيّة كالتّالي: 35 من مريضات متلازمة المبيض متعدّد الكيسات (70%) متغايري الزيجوت، 10 مريضات (20%) متماثلي الزيجوت بالنسبة للأليل B و5 مريضات (10%) متماثلي الزيجوت بالنسبة للأليل b.

في حين كانت 26 أنثى سليمة (49%) متغايري الزيجوت، 18 أنثى سليمة (34%) متماثلي الزيجوت بالنسبة للأليل B، 10 أنثى سليمة (17%) متماثلي الزيجوت بالنسبة للأليل b، و عند تطبيق اختبار كاي مربع بين المجموعتين المدروستين لم يكن الفارق مُعتد به إحصائياً بين المجموعة المرضيّة والمجموعة الشاهدة حيث كانت قيمة P value تساوي 0.0967.

توزعت الألائل بين مجموعات الدراسة كالتالي: 55 (55%) أليلاً من النمط B و62 (45%) أليلاً من النمط b عند مجموعة المريضات مقابل 62 (58%) أليلاً من النمط B و44 (42%) أليلاً من النمط b لدى المجموعة الشاهدة.

عند تطبيق اختبار كاي مربع بين المجموعتين المدروستين لم يكن الفارق معتد به إحصائياً بين المجموعة المرضية والمجموعة الشاهدة حيث كانت P value تساوي 0.6735.

المناقشة Discussion

متلازمة المبيض متعدّد الكيسات متلازمة معقّدة متعدّدة العوامل المسبّبة والتي تؤثّر على نوعيّة حياة المريضة، ولها عدد من المضاعفات النفسيّة والهرمونيّة، ولم تحدّد الدّراسات العوامل المسبّبة بدقّة بل تنوعت بين عوامل هرمونيّة وبيئيّة وجينيّة، ومن جهة أخرى تناولت العديد من الدّراسات في سوريّة التعدّدات الشكليّة وحيدة النكليوتيد وعلاقتها مع العديد من الأمراض ومع مستويات فيتامين D لدى الأصحاء.

لوحظ وجود اختلاف في توزع الأنماط الجينية ولاسيما Bb حيث كان أعلى عند المجموعة المرضية ولكن لم يكن هذا الفارق مُعتد به إحصائياً حيث كانت قيمة p>0.05. وقد توافقت نتائجنا مع دراسة كل من Bagheri وزملاؤه في تركيا و Song وزملاؤه في كوريا و Ramezaniوزملاؤه و Mahmoudiوزملاؤه في إيران^{(18,19,20,21)}، واختلفنا مع Shi وزملاؤه في الصين⁽²²⁾ الذين وجدوا ارتباطاً بين التعدد الشكلي BsmI والأهبة للإصابة بمتلازمة المبيض متعدد الكيسات، وكذلك Xavier وزملاؤه في البرازيل الذين وجدو أن النمط الجيني Bb مرتبط مع متلازمة المبيض متعدد الكيسات⁽²³⁾.

يمكن أن تعزى تلك الفروقات إلى الاختلافات البيئيّة والعرقيّة بين المجتمعات المدروسة حيث أنه يمكن أن تتفاعل التعدّدات الشكلية مع العوامل البيئيّة وتؤثر على قابليّة الإصابة ولاسيما أن PCOS متلازمة متعدّدة العوامل، وبالتالي يمكن أن يكون لعدة جينات تأثيرٌ على الاستعداد للإصابة بالمتلازمة بحيث يكون لكل جين تأثيرات أصغريّة، كما أن عدد ونمط الجينات الوظيفية قد يختلف في المجموعات العرقية المختلفة، إضافةً إلى اختلاف حجم العينة المدروسة حيث أنّ عدد أفراد العيّنة له دور مهمّ في الدّراسات التي تبحث في علاقة الارتباط بين التعدّدات الشكليّة وأمراض معيّنة، وتكون النتائج أكثر موثوقيّةً مع الحجم الكبير للعيّنة، وهذا يعدّ أحد محدوديات هذه الدراسة.

 

الاستنتاجات Conclusions

تعد دراستنا الأولى في سورية في تحرّي تواتر التعدّد الشكليّ BsmI لدى مريضات PCOS وأظهرت الدراسة عدم وجود فروقٍ إحصائية في نسب انتشار الأنماط الجينيّة والألائل للتعدّد الشكليّ BsmI بين مجموعتي الدراسة، وعدم وجود علاقة بين التعدّد الشكليّBsmI  في جينVDR  والأهبة للإصابة بمتلازمة المبيض متعدّد الكيسات لدى النساء السوريات بالمقارنة مع مجموعة سليمة شاهدة.

 

قائمة الاختصارات List of abbreviations

المقابل	الاختصار
3′ untranslated region	3′UTR
Androgen Receptor	AR
Follicle-stimulating hormone receptor	FSHR
Luteinizing hormone	LH
messenger ribonucleic acid	mRNA
Polycystic ovary syndrome	PCOS
Polymerase chain reaction	PCR
Restriction fragment length polymorphism	RFLP
Vitamin D receptor	VDR

 

الموافقة الأخلاقية والموافقة على المشاركة Ethics approval and consent to participate

حصلت هذه الدراسة على موافقة لجنة أخلاقيات البحث العلميّ في جامعة دمشق بتاريخ 24/10/2023، وبرقم 5675.

 

تضارب المصالح Conflict of interests

يقر المؤلفون بعدم وجود مصالح متضاربة.

 

التمويل   Funding

تم تمويل هذا البحث من قِبَل جامعة دمشق.

 

مساهمات المؤلفين Authors’ contributions

آيه اسماعيل: الباحث الأساسي، القيام بالجزء العملي من البحث والكتابة النظرية للأطروحة والمقالة.

مروان الحلبي: المشرف المشارك، الإشراف الأساسي على جمع العينات والإشراف على الجانب السريريب المتعلق بالمريضات.

شادن حداد: المشرف الأساسي في البحث، الإشراف على جميع تفاصيل البحث من تصميم خطة البحث والتوجيهات في الجانب العملي وتدقيق الكتابة النظرية.

المراجع :

1- Morgante, G., Darino, I., Spanò, A., Luisi, S., Luddi, A., Piomboni, P., Governini, L., & De Leo, V. (2022). PCOS Physiopathology and Vitamin D Deficiency: Biological Insights and Perspectives for Treatment. In Journal of Clinical Medicine (Vol. 11, Issue 15). MDPI. https://doi.org/10.3390/jcm11154509
2- Kainth, R., Kaur, G., Amar, B. K., Baba, S., Singh, A., & Singh, J. (n.d.). POLYCYSTIC OVARY SYNDROME (PCOS)-A REVIEW. www.wjpls.org
3- Bohsas, H., Alibrahim, H., Swed, S., Abouainain, Y., Aljabali, A., Kazan, L., Jabban, Y. K. E., Mehmood, Q., Sawaf, B., Eissa, N., Alkasem, M., Edrees, Y., Cherrez-Ojeda, I., Fathey, S., Rashid, G., Hafez, W., AbdElrahim, E., Osman, H., Emran, T. Bin, … Khandaker, M. U. (2024). Prevalence and knowledge of polycystic ovary syndrome (PCOS) and health-related practices among women of Syria: a cross-sectional study. Journal of Psychosomatic Obstetrics and Gynecology, 45(1). https://doi.org/10.1080/0167482X.2024.2318194
4- Che, Y., Yu, J., Li, Y. S., Zhu, Y. C., & Tao, T. (2023). Polycystic Ovary Syndrome: Challenges and Possible Solutions. Journal of Clinical Medicine, 12(4). https://doi.org/10.3390/jcm12041500
5- Khan, M. J., Ullah, A., & Basit, S. (2019). Genetic basis of polycystic ovary syndrome (PCOS): Current perspectives. In Application of Clinical Genetics (Vol. 12, pp. 249–260). Dove Medical Press Ltd. https://doi.org/10.2147/TACG.S200341
6- Teede, H. J., Tay, C. T., Laven, J. J. E., Dokras, A., Moran, L. J., Piltonen, T. T., Costello, M. F., Boivin, J., Redman, L. M., Boyle, J. A., Norman, R. J., Mousa, A., Joham, A. E., Arlt, W., Azziz, R., Balen, A., Bedson, L., Berry, L., Boivin, J., … Tan, K. (2023). Recommendations From the 2023 International Evidence-based Guideline for the Assessment and Management of Polycystic Ovary Syndrome. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 108(10), 2447–2469. https://doi.org/10.1210/clinem/dgad463
7- Kosova, G., & Urbanek, M. (2013). Genetics of the polycystic ovary syndrome. In Molecular and Cellular Endocrinology (Vol. 373, Issues 1–2, pp. 29–38). https://doi.org/10.1016/j.mce.2012.10.009
8- Song, D. K., Lee, H., Hong, Y. S., & Sung, Y. A. (2019). Vitamin D receptor and binding protein polymorphisms in women with polycystic ovary syndrome: A case control study. BMC Endocrine Disorders, 19(1). https://doi.org/10.1186/s12902-019-0477-x
9- Zhang, Y., Wu, S., & Sun, J. (2013). Vitamin D, vitamin D receptor and tissue barriers. Tissue Barriers, 1(1), e23118. https://doi.org/10.4161/tisb.23118
10- Khalifa, A. A., Reham, H., Elazony, M., Musa, A.-K., & Elsayed, S. (n.d.). The Role Of Vitamin D In Polycystic Ovary Syndrome. Journal of Pharmaceutical Negative Results ¦, 13. https://doi.org/10.47750/pnr.202
11- Grzesiak, M. (2020). Vitamin D3 action within the ovary-an updated review. Physiological Research, 69, 371–378. https://doi.org/10.33549/PHYSIOLRES.934266
12- Menichini, D., Forte, G., Orrù, B., Gullo, G., Unfer, V., & Facchinetti, F. (2022). The role of vitamin D in metabolic and reproductive disturbances of polycystic ovary syndrome: A narrative mini-review. International Journal for Vitamin and Nutrition Research. Internationale Zeitschrift Fur Vitamin- Und Ernahrungsforschung. Journal International de Vitaminologie et de Nutrition, 92(2), 126–133. https://doi.org/10.1024/0300-9831/A000691
13- Voltan, G., Cannito, M., Ferrarese, M., Ceccato, F., & Camozzi, V. (2023). Vitamin D: An Overview of Gene Regulation, Ranging from Metabolism to Genomic Effects. Genes 2023, Vol. 14, Page 1691, 14(9), 1691. https://doi.org/10.3390/GENES14091691
14- Mohammadifard, N., Sadeghian, L., Hassannejad, R., Khosravi, E., Gharipour, M., Karimi, S., Hosseini, S., Sepahifar, M., Bahrami, G., Haghighatdoost, F., & Sarrafzadegan, N. (2024). Comparing vitamin D receptor gene polymorphisms in rs11568820, rs7970314, rs4334089 between COVID-19 patients with mild and severe symptoms: a case control study. Scientific Reports 2024 14:1, 14(1), 1–7. https://doi.org/10.1038/s41598-024-57424-0
15- Ruiz-Ballesteros, A. I., Meza-Meza, M. R., Vizmanos-Lamotte, B., Parra-Rojas, I., & de la Cruz-Mosso, U. (2020). Association of vitamin D metabolism gene polymorphisms with autoimmunity: Evidence in population genetic studies. International Journal of Molecular Sciences, 21(24), 1–24. https://doi.org/10.3390/ijms21249626
16- HADDAD, S. (2014). Vitamin-D receptor (VDR) gene polymorphisms (Taq-I & Apa-I) in Syrian healthy population. Meta Gene, 2, 646–650. https://doi.org/10.1016/j.mgene.2014.08.005
17- Douroudis, K., Tarassi, K., Ioannidis, G., Giannakopoulos, F., Moutsatsou, P., Thalassinos, N., & Papasteriades, C. (2003). Association of vitamin D receptor gene polymorphisms with bone mineral density in postmenopausal women of Hellenic origin. Maturitas, 45(3), 191–197. https://doi.org/10.1016/S0378-5122(03)00148-8
18- Bagheri, M., Rad, I. A., Nima, ;, Jazani, H., Nanbakhsh, F., & Associate, ; (2012). 48), 4(8.696), 64(69.57) and 28(30.43) in cases and 29. In Maedica A Journal of Clinical Medicine (Vol. 7, Issue 4).
19- Mahmoudi, T. (2009). Genetic variation in the vitamin D receptor and polycystic ovary syndrome risk. Fertility and Sterility, 92(4), 1381–1383. https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2009.05.002
20- Ramezani, N., Ostadsharif, M., & Nayeri, H. (2020). Association of BsmI variant of vitamin d receptor gene with polycystic ovary syndrome: A case-control study. International Journal of Reproductive BioMedicine, 18(10), 877–884. https://doi.org/10.18502/ijrm.v13i10.7772
21- Song, D. K., Lee, H., Hong, Y. S., & Sung, Y. A. (2019). Vitamin D receptor and binding protein polymorphisms in women with polycystic ovary syndrome: A case control study. BMC Endocrine Disorders, 19(1). https://doi.org/10.1186/s12902-019-0477-x
22- Shi, X. Y., Huang, A. P., Xie, D. W., & Yu, X. L. (2019). Association of vitamin D receptor gene variants with polycystic ovary syndrome: A meta-analysis. BMC Medical Genetics, 20(1). https://doi.org/10.1186/s12881-019-0763-5
23- Xavier, L. B., Gontijo, N. A., Rodrigues, K. F., Cândido, A. L., dos Reis, F. M., de Sousa, M. C. R., Silveira, J. N., Oliveira Silva, I. de F., Ferreira, C. N., & Gomes, K. B. (2019). Polymorphisms in vitamin D receptor gene, but not vitamin D levels, are associated with polycystic ovary syndrome in Brazilian women. Gynecological Endocrinology, 35(2), 146–149. https://doi.org/10.1080/09513590.2018.1512966